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醫院污水排放標準
點(diǎn)擊次數:8622 更新時(shí)間:2010-03-10


 
   主編部門(mén):中華人民共和國衛生部

  批準部門(mén):中華人民共和國國家經(jīng)濟委員會(huì )

  中華人民共和國衛生部

  試行日期:1983年6月1日

  關(guān)于頒發(fā)《醫院污水排放標準》的通知經(jīng)基〔1983〕37號根據原國家建委(78)建發(fā)設字第562號和衛生部(77)衛科字第240號通知的要求,由衛生部會(huì )同有關(guān)單位共同編制的《醫院污水排放標準》,已經(jīng)有關(guān)部門(mén)會(huì )審?,F批準《醫院污水排放標準》GBJ48—83為國家標準,自
一九八三年六月一日起試行。

  本標準由衛生部負責管理,其具體解釋等工作由中國醫學(xué)科學(xué)院衛生研究所負責。

  國家經(jīng)濟委員會(huì )

  衛生部

  一九八三年一月十二日

  編制說(shuō)明

  本標準是根據原國家建委(78)建發(fā)設字562號和衛生部(77)衛科字第240號文下達的制訂的任務(wù),由我部委托中國醫學(xué)科學(xué)院衛生研究所主持,會(huì )同有關(guān)省、市衛生防疫站、醫學(xué)院校、科研與建筑設計等有關(guān)單位編制而成。

  遵循我國“預防為主”的衛生工作方針和《中華人民共和國環(huán)境保護法(試行)》,為防止醫院排放帶有病原體的污水污染環(huán)境,危害人體健康,特制訂本標準。

  在編制過(guò)程中,曾對部分省、市、自治區醫院污水的情況進(jìn)行重點(diǎn)調查,各課題組參照有關(guān)的標準、文獻,還進(jìn)行了必要的科學(xué)試驗,并向有關(guān)單位廣泛征求意見(jiàn),經(jīng)多次討論修改,由衛生標準技術(shù)委員會(huì )環(huán)境衛生分委員會(huì )會(huì )同有關(guān)部門(mén)審核定稿。

  本標準分總則、排放標準、設計要求與管理要求等四章和附錄一,檢驗方法。

  在試行本標準的過(guò)程中,請各單位注意積累資料,總結經(jīng)驗,如發(fā)現有需要修改和補充之處,請將意見(jiàn)和有關(guān)資料寄送中國醫學(xué)科學(xué)院衛生研究所,并抄送我部,以便修訂時(shí)參考。

  衛生部

  一九八三年一月

  *章 總則

  第1.0.1條 為貫徹“預防為主”的衛生工作方針和《中華人民共和國環(huán)境保護法(試行)》。防止醫院排放帶有病原體的污水污染環(huán)境,危害人體健康,特制訂本標準。

  第1.0.2條 本標準適用于縣及縣以上綜合醫院,以及腸道傳染病和結核病的專(zhuān)科醫院、療養院、其它有關(guān)的醫療衛生機構(以下簡(jiǎn)稱(chēng)醫院)。

  第1.0.3條 新建、擴建、改建的醫院,必須按照本標準的規定,將污水的處理設施,與主體工程同時(shí)設計、同時(shí)施工、同時(shí)使用。

  現有醫院應積極采取行之有效的措施,限期達到本標準的要求。
 
      第二章 排放標準

  第2.0.1條 醫院污水經(jīng)處理與消毒后,應達到下列標準:

  一、連續三次各取樣500毫升進(jìn)行檢驗,不得檢出腸道致病菌和結核桿菌。

  二、總大腸菌群數每升不得大于500個(gè)。

  第2.0.2條 當采用氯化法消毒時(shí),接觸時(shí)間和接觸池出水中的余氯含量,應符合表2.0.2的要求:

  接觸時(shí)間與總余氯量                     表2.0.2
醫院污水類(lèi)別
接觸時(shí)間(小時(shí))
總余氯量 毫克/升
綜合醫院污水及含腸道致病菌污水
不少于1
4~5
含結核桿菌污水
不少于1.5
6~8
  第2.0.3條 污水處理構筑物中的污泥,必須經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理,污泥排放時(shí)應達到下列標準:

  一、蛔蟲(chóng)卵死亡率大于95%;

  二、糞大腸菌值不小于10-2;

  三、每10克污泥(原檢樣中),不得檢出腸道致病菌和結核桿菌。

  第2.0.4條 當污泥采用高溫堆肥法進(jìn)行無(wú)害化處理時(shí),堆肥的溫度必須大于50℃,并應持續5天以上。

  第2.0.5條 無(wú)上、下水道設備或集中式污水處理構筑物的醫院,對有傳染性的糞便,必須進(jìn)行單獨消毒或其它無(wú)害化處理。

  第2.0.6條 醫院污水經(jīng)處理和消毒后,其所含的污染物質(zhì)與有害物質(zhì)的含量應符合現行的有關(guān)標準的要求。
 
       第三章 設計要求

  第3.0.1條 醫院應設置集中式污水處理構筑物。嚴禁采用滲井、滲坑排放污水。

  第3.0.2條 醫院職工生活區和行政區的污水,應與病區的污水分流。

  第3.0.3條 醫院污水處理構筑物的位置,宜設在醫院建筑物當地夏季小頻率風(fēng)向的上風(fēng)側,與周?chē)ㄖ镏g宜設綠化防護地帶。

  第3.0.4條 處理構筑物的設計,應滿(mǎn)足下列要求:

  一、采取防腐蝕、防滲漏措施;

  二、確保處理效果,安全耐用;

  三、操作方便,便于消毒和清掏,有利于操作人員的勞動(dòng)保護。

  第3.0.5條 氯化法消毒系統的設計,應滿(mǎn)足下列要求:

  一、備有發(fā)生故障時(shí)的應急設施;

  二、使用液態(tài)氯時(shí),應有安全設施,嚴禁直接以鋼瓶向污水中投加氯氣。
 
      第四章 管理要求

  第4.0.1條 醫院必須對污水、污泥嚴加管理。未經(jīng)消毒或無(wú)害化處理,不準任意排放、清掏,用作農肥。

  第4.0.2條 醫院污水處理設施應定期維修,保證正常運轉,當處理設備發(fā)生故障時(shí),必須采取適當措施,確保污水仍能按標準要求排放。

  第4.0.3條 醫院污水處理設施,應配備管理人員和檢驗人員。

  第4.0.4條 醫院污水的監測,應符合下列要求:

  一、余氯:連續式消毒,每日至少監測二次,間歇式消毒,每次排放之前監測;

  二、總大腸菌群數:每?jì)芍苤辽俦O測一次;

  三、傳染病和結核病醫院,應根據需要增測致病菌。

  第4.0.5條 各級衛生防疫部門(mén),應對轄區內醫院的污水、污泥處理情況,進(jìn)行經(jīng)常性衛生監督,每年抽查不得少于二次。

  第4.0.6條 污水、污泥的檢驗方法,應符合附錄一的規定。
 
     附錄一 醫院污水、污泥檢驗方法

  一污水總余氯的測定方法

  一、原理:采用碘滴定法。用碘標準溶液反滴定(與余氯反 應后)過(guò)量的硫代硫酸鈉標準溶液。

  二、試劑:

  1、0.00564N硫代硫酸鈉標準溶液。

 ?。?)先配制約0.1N硫代硫酸鈉溶液——稱(chēng)取約25克分析純

  硫代硫酸鈉(Na2S203·5H2O)溶于煮沸放冷的蒸餾水中,稀釋至1000毫升,加入0.4克氫氧化鈉或0.2克無(wú)水碳酸鈉,儲存于棕色瓶?jì)?,可保存數月?br />
 ?。?)標定:稱(chēng)取0.1500克干燥的分析純碘酸鉀(KI03)放于250毫升錐形瓶?jì)?,加?00毫升蒸餾水,加熱溶解后,加入3克碘化鉀和10毫升冰醋酸,靜置5分鐘,自滴定管加約0.1N硫代硫酸鈉溶液,不斷振蕩錐形瓶,直至顏色變?yōu)榈S色;加入1毫升淀粉溶液,繼續用硫代硫酸鈉溶液滴至剛變?yōu)闊o(wú)色為止,記錄總用量(如滴定完畢,放置若干時(shí)間后,錐形瓶?jì)热芤阂蚪佑|空氣氧化又顯藍色??刹槐卦俚味ǎ?。

 ?。?)計算:

  硫代硫酸鈉溶液的當量濃度

  式中W——碘酸鉀重量(克);

    V——硫代硫酸鈉溶液的用量(毫升)。

 ?。?)配制0.00564N硫代硫酸鈉標準溶液:用除去二氧化碳的蒸餾水,將上面標定后的0.1N硫代硫酸鈉溶液稀釋。

  2、5%碘化鉀溶液溶解50克分析純碘化鉀于少量新煮沸放冷的蒸餾水中,再稀釋至1000毫升,盛于棕色帶玻璃塞瓶中,好冷藏。如發(fā)現溶液顏色變黃,應予重配。

  3、醋酸鹽緩沖液pH=4稱(chēng)取146克無(wú)水醋酸鈉或243克三水醋酸鈉于蒸餾水中,加480克冰醋酸,用蒸餾水稀釋至1000毫升。4、0.1N碘溶液溶解40克分析純碘化鉀于25毫升蒸餾水中,加入13克分析純碘片,不斷攪拌到溶解為止。移入1000毫升容量瓶中,加水至刻度,混勻,待標定。

  5、0.1000N亞砷酸鈉標準溶液稱(chēng)取預先在干燥器內經(jīng)濃硫酸干燥的分析純三氧化二砷(Aa203)2.4728克于300毫升燒杯中,加入20毫升1N氫氧化鈉溶液,攪拌使溶解(注意Aa203劇毒?。?。加1N鹽酸或硫酸中和過(guò)量的氫氧化鈉,直至溶液接近中性為止(采用pH試紙)。

  將配好的亞砷酸鈉溶液轉入500毫升容量瓶中,加水稀釋至刻度,混勻。

  6、0.1N碘溶液的標定

  準確量取40~50毫升0.1000N亞砷酸鈉標準溶液于250毫升錐形瓶?jì)?。用待標定?.1N碘溶液滴定,以淀粉作指示劑,滴至剛顯淡藍色為終點(diǎn)。如能在接近終點(diǎn)時(shí)向溶液中通入二氧化碳使之飽和,可得到很準確的滴定終點(diǎn)。

  7、0.0282N碘標準溶液

  將25克分析純碘化鉀放入1000毫升容量瓶中,加入少量蒸餾水使之溶解。準確加入標定后的0.1N碘標準溶液,用蒸餾水稀釋至刻度。所需加入標定后的0.1N碘標準溶液的體積,按下式計算:

  

  式中V——標定后的0.1N碘標準溶液的毫升數;

    N——標定后的0.1N碘標準溶液的當量濃度;

    V′——配制0.0282N碘標準溶液的體積為1000毫升;

    N′——配制的碘標準溶液的當量濃度為0.0282N。

  為了測定更準確,好每天用0.1000N亞砷酸鈉標準溶液按上述操作標定一次(預計用去5~10毫升0.1000N亞砷酸鈉溶液即可)。

  此溶液應盛于棕色玻璃磨口瓶中,存放時(shí)避免陽(yáng)光直射,不可接觸橡膠制品。

  8、1%淀粉溶液稱(chēng)取0.5克可溶性淀粉于200毫升燒杯內,加少量蒸餾水調成糊狀,加入剛煮沸的蒸餾水100毫升。冷卻后,加入0.13克水楊酸作保存劑。

  三、步驟:

  1 污水水樣中余氯小于10毫克燉升時(shí),取200毫升污水樣;余氯多時(shí),應按比例減少水樣體積。

  2 將200毫升污水樣加入500毫升錐形瓶中。加入500毫升0.00564N硫代硫酸鈉標準溶液,1毫升5%碘化鉀溶液和1毫升醋酸鹽緩沖液,使pH保持在3.5~4.2之間。用0.0282N碘標準溶液滴定,接近終點(diǎn)前,加入1毫升淀粉溶液,滴至剛顯淡藍色為終點(diǎn)(混勻后藍色不應消失)。把后1滴碘液的體積(約為0.05毫升)從讀數中減去。200毫升污水樣消耗1毫升0.00564N硫代硫酸鈉溶液時(shí),相當于存在1毫克/升余氯,故余氯在5毫克/升時(shí),需用5毫升試劑;余氯在10毫克燉升時(shí),應加入10毫升試劑。污水中余氯更高時(shí),就按比例增加試劑。碘滴定法測得的余氯為總余氯,并按下式計算:

  

  式中CL2——總余氯(毫克/升);

    A——0.00564N硫代硫酸鈉標準溶液的毫升數;

    B——0.0282N碘標準溶液的毫升數;

    C——污水樣毫升數。

  二污水總大腸菌群的檢驗方法

  一、采樣方法

  用采水器或其他滅菌容器采取污水樣1000毫升,放入滅菌瓶?jì)?,如果是?jīng)加氯處理的污水,需加1.5%硫代硫酸鈉5毫升中和余氯。

  二、檢驗方法

  總大腸菌群系指一群需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌在37℃恒溫箱內,培養24小時(shí),能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣??偞竽c菌群數系指每升污水中,所含的總大腸菌群的數目。

 ?。ㄒ唬┏醢l(fā)酵試驗:以無(wú)菌操作將各盛有3倍濃縮乳糖蛋白胨培養液5毫升的5支發(fā)酵管內,各接種污水樣10毫升,將各盛有單料乳糖蛋白胨培養液約10毫升5支的發(fā)酵管內,各接種污水樣1毫升,再將各盛有單料乳糖蛋白臟培養液約10毫升的5支發(fā)酵管內,各接種1∶10稀釋的污水樣1毫升(相當于原污水樣0.1毫升)。將此15支管已接種的發(fā)酵管置于37℃恒溫箱內,培養24小時(shí)。

 ?。ǘ┢桨宸蛛x:經(jīng)培養24小時(shí)后,將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管,分別接種于伊紅美蘭培養基或品紅亞硫酸鈉培養基上,置37℃恒溫箱培養18~24小時(shí),挑選符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分,進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。

  1 伊紅美蘭培養基上的菌落色澤:

 ?。?)深紫黑色,具有金屬光澤的菌落;

 ?。?)紫黑色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;

 ?。?)淡紫紅色、中心色較深的菌落。

  2 品紅亞硫酸鈉培養基上的菌落色澤:

 ?。?)紫紅色,具有金屬光澤的菌落;

 ?。?)深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;

 ?。?)淡紅色,中心色較深的菌落。

 ?。ㄈ桶l(fā)酵試驗:涂片、鏡檢的菌落,如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,則挑取上述典型菌落1~3個(gè)接種于一支單料乳糖發(fā)酵管內,然后置于37℃恒溫箱內,培養24小時(shí),產(chǎn)酸產(chǎn)氣者(包括小量產(chǎn)氣)即證實(shí)有大腸菌群存在。

  根據證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管數,查對總大腸菌群近似數(MpN)檢索表(附表1.1)即是每升污水中的大腸菌群數。此MPN表中所列數值系指100毫升水樣中的細菌數,因此需將表中的數值再乘10、為每1000毫升水中的細菌數。舉例:某一污水樣接種10毫升的5支管中有5管為陽(yáng)性;接種1毫升的5支管中有2管為陽(yáng)性;接種1∶10稀釋水樣1毫升(即原污水樣0.1毫升)的5支管皆為陰性,即結果為5、2、0,查附表1.1得知100毫升污水中總大腸菌群數為49個(gè),即1000毫升污水中總大腸菌群數為49×10=490個(gè)。

  總大腸菌群近似數(MPN)檢索表附表1.1

 ?。偨臃N量55.5毫升,其中5份10毫升水樣;5份1毫升水樣;5份0.1毫升水樣)
接種量(毫升)
每100毫升水
樣中總大腸菌
群近似數
接種量(毫升)
每100毫升水
樣中總大腸
菌群近似數
10
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10
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5
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0
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  續表1
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
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12
12
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20
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25

  續表2
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
10
1
0.1
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0.1
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3
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1
1
1
1
1
1
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1
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14
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3
3
5
5
5
5
5
5
0
1
2
3
4
5
25
29
32
37
41
45
 續表3
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
10
1
0.1
10
1
0.1
4
4
4
4
4
4
0
0
0
0
0
0
0
1
2
3
4
5
13
17
21
25
30
36
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
0
1
2
3
4
5
34
40
47
54
62
69
4
4
4
4
4
4
1
1
1
1
1
1
0
1
2
3
4
5
17
21
26
31
36
42
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
0
1
2
3
4
5
41
48
56
64
72
81
4
4
4
4
4
4
2
2
2
2
2
2
0
1
2
3
4
5
22
26
32
38
44
50
5
5
5
5
5
5
0
0
0
0
0
0
0
1
2
3
4
5
23
31
43
58
76
95
4
4
4
4
4
4
3
3
3
3
3
3
0
1
2
3
4
5
27
33
39
45
52
59
5
5
5
5
5
5
1
1
1
1
1
1
0
1
2
3
4
5
33
46
63
84
110
130

  續表4
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
接種量(毫升)
每100毫升水樣中總大腸菌群近似數
10
1
0.1
10
1
0.1
5
5
5
5
5
5
2
2
2
2
2
2
0
1
2
3
4
5
49
70
94
120
150
180
5
5
5
5
5
5
4
4
4
4
4
4
0
1
2
3
4
5
130
170
220
280
350
430
5
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
3
0
1
2
3
4
5
79
110
140
180
210
250
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
0
1
2
3
4
5
240
350
540
920
1600
>1600

  三沙門(mén)氏菌屬和志賀氏菌屬的檢驗方法

  甲、污水

  一、樣品處理

  水樣500毫升,加入滅菌的10%無(wú)水碳酸鈉溶液2毫升,混合后,再加入滅菌的10%硫酸鐵溶液1.75毫升,混合均勻。靜置1小時(shí),傾去上清液(沉淀物約為40毫升左右)。進(jìn)行沙門(mén)氏菌屬和志賀氏菌屬培養。

  二、增菌培養

  1 沙門(mén)氏菌屬:吸取樣品處理后的沉淀物20毫升,加于20毫升雙料亞硒酸鹽(SF)增菌液內,也可加于亞硒酸鹽甘露醇(SFM)或氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液內。置于37℃或41℃恒溫箱;培養24小時(shí)。

  2 志賀氏菌屬:吸取樣品處理后的沉淀物20毫升,加于20毫升雙料革蘭氏陰性(GN)增菌液內,置于37℃恒溫箱,培養6小時(shí)。

  三、平板分離

  1 沙門(mén)氏菌屬:取上述經(jīng)培養的沙門(mén)氏菌用增菌培養液,接種沙門(mén)氏菌屬——志賀氏菌屬(SS)平板或??送幸颍℉ekto-en簡(jiǎn)稱(chēng)HE)平板,置于37℃恒溫箱培養24小時(shí)。也可接種亞硫酸鉍(BS)平板,置于37℃恒溫箱,培養48小時(shí)。

  2 志賀氏菌屬:取上述經(jīng)培養的志賀氏菌用增菌培養液,接種SS平板或HE平板,置于37℃恒溫箱,培養24小時(shí)。

  四、挑選菌落

  1 沙門(mén)氏菌屬:挑取在SS平板上,呈無(wú)色透明或中間有黑心,直徑1~2毫米的菌落;挑取在HE平板上,呈藍綠色,有或無(wú)黑心,直徑1~2毫米的菌落;挑取在BS平板上,呈黑色,培養基周?chē)哂薪饘俟鉂傻木洹?br />
  2 志賀氏菌屬:挑取在SS平板上,呈無(wú)色透明,直徑1~1.5毫米的菌落,挑取在HE平板上,呈綠色的菌落。

  3 每個(gè)平板少挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落,轉種三糖鐵或其他鑒別培養基中,置于37℃恒溫箱;培養18~24小時(shí)。

  五、生化試驗及血清學(xué)檢驗

  1 沙門(mén)氏菌屬:在三糖鐵培養基中,如不發(fā)酵乳糖,葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,一般產(chǎn)生硫化氫。有動(dòng)力者,先與沙門(mén)氏菌A~F群O多價(jià)血清作玻璃片凝集,凡與多價(jià)O血清凝集者,再與O因子血清凝集,以確定其所屬群別,然后用H因子血清,確定血清型。雙相菌

  應證實(shí)兩相的H抗原,有Vi抗原的菌型(傷寒和丙型副傷寒沙門(mén)氏菌)應用Vi因子血清檢查。

  化試驗:應進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗。沙門(mén)氏菌屬中除傷寒沙門(mén)氏菌和雞沙門(mén)氏菌產(chǎn)氣外,通常發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖(但豬傷寒沙門(mén)氏菌、雛沙門(mén)氏菌不發(fā)酵麥芽糖),不分解乳糖、蔗糖,尿素酶和靛基質(zhì)為陰性,通常產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門(mén)氏菌和傷寒沙門(mén)氏菌的O型菌株無(wú)動(dòng)力外,通常均有動(dòng)力。如遇多價(jià)O血清不凝集而一般生化反應符合上述情況時(shí),可加做側金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗,沙門(mén)氏菌均為陰性。

  2 志賀氏菌屬:在三糖鐵培養基上,葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,無(wú)動(dòng)力,不產(chǎn)生硫化氫,上層斜面乳糖不分解。

  生化試驗:應進(jìn)行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖,蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動(dòng)力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖,但不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型有時(shí)產(chǎn)生少量氣體),一般不能分解乳糖及蔗糖,宋內氏志賀氏菌對乳糖及蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫,不分解尿素,無(wú)動(dòng)力。對甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生,則因菌株不同而異。

  如遇多價(jià)血清玻璃片凝集試驗為陰性,而生化反應符合上述情況時(shí),可加做肌醇、水楊素、V—P、枸櫞酸鹽、氰化鉀等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應。

  血清學(xué)檢查:志賀氏菌屬分為4個(gè)群,先與多價(jià)血清作玻璃片凝集試驗,如為陽(yáng)性,再分別與A、B、C、D群血清凝集,并進(jìn)一步與分型血清做玻璃片凝集,后確定其血清型。

  乙、污泥

  一、樣品處理

  用滅菌匙稱(chēng)取污泥30克,放入滅菌容器內,加入300毫升滅菌水,充分混勻制成1∶10混懸液。

  二、增菌培養

   1 沙門(mén)氏菌屬:吸取上述1∶10混懸液100毫升,加于100毫升雙料亞硒酸鹽(SF)增菌液內,也可加于亞硒酸鹽甘露醇(SFM)或氯化鎂孔雀綠(mm)增菌液內。置于37℃或41℃恒溫箱,培養24小時(shí)。

  2 志賀氏菌屬:吸取上述1∶10混懸液100毫升,加于雙料革蘭氏陰性(GN)100毫升增菌液內。置于37℃恒溫箱,培養6小時(shí)。

  三、平板分離、挑選菌落、生化試驗及血清學(xué)檢查均與污水樣品檢驗方法相同。

  四污泥糞大腸菌值的檢驗方法

  一、初發(fā)酵試驗:按圖1所示將污泥稀釋?zhuān)謩e將污泥樣品接種于裝有10毫升乳糖膽鹽培養液的內有倒管的試管中。再將已接種的四支試管置于44℃恒溫箱,培養24小時(shí)。

  圖1污泥的稀釋和接種示意圖

  二、平板分離:經(jīng)培養24小時(shí)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管,分別劃線(xiàn)接種于伊紅美蘭培養基或品紅亞硫酸鈉培養基上。置于37℃恒溫箱培養18~24小時(shí)。挑選符合下列特征菌落的一小部分。進(jìn)行涂片,革蘭氏染色,鏡檢。

  1 伊紅美蘭培養基上的菌落色澤;

 ?。?)深紫黑色,具有金屬光澤的菌落;

 ?。?)紫黑色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;

 ?。?)淡紫紅色,中心色較深的菌落;

  2 品紅亞硫酸鈉培養基上的菌落色澤;

 ?。?)紫紅色,具有金屬光澤的菌落;

 ?。?)深紅色,不帶或略帶金屬光澤菌落;

 ?。?)淡紅色,中心色較深的菌落。

  三、復發(fā)酵試驗:上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,則挑取該菌落的另一部分再接種于內有倒管的乳糖發(fā)酵管中每管可接種分離自同一初發(fā)酵管的典型的菌落1~3個(gè)。置于44℃恒溫箱培養24小時(shí)。有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實(shí)有糞大腸菌群存在。按陽(yáng)性管數查糞大腸菌值檢索表(附表1.2)即得出每升(1000克)糞大腸菌值。例如接種污泥量1克發(fā)酵管陽(yáng)性(+),0.1毫升發(fā)酵管陰性(-),0.01毫升為陽(yáng)性(+),0.001毫升為陰性(-)查附表1.2,當陽(yáng)性,陰性管數為+-+-時(shí),糞大腸菌值為0.1。

  糞大腸菌值檢索表(接種總量1.111克)           附表1.2
接種樣品量(毫升或克)
類(lèi)大腸菌
1
0.1
0.01
0.001
菌 值
-
-
-
-
-
-
-
+
-
+
+
+
+
+
+
+
-
-
-
+
-
+
+
-
+
-
-
-
+
+
+
+
-
-
+
-
+
-
+
-
+
-
+
+
-
-
+
+
-
+
-
-
+
+
-
-
+
+
-
+
-
+
-
+
>1.11
1.11
1.11
1.05
0.56
0.53
0.46
0.43
0.36
0.11
0.1
0.06
0.04
0.01
0.004
<0.004

  五污泥蛔蟲(chóng)卵的檢驗方法

  一、污泥樣品的采集:

  先把泥堆盡量劃為四等份,而后在每份的中間,用鐵鍬或小鏟各采污泥約500克。同時(shí),在堆泥的中間也采500克,一并放在塑料桶或搪瓷桶中。攪拌均勻,并挑去固體夾雜物,再從中取出500克置于塑料袋或其他容器中,帶回實(shí)驗室。

  二、污泥樣品的處理:

  將現場(chǎng)帶回的樣品,倒于燒杯中,如遇樣品稍干且有結塊時(shí),可將其倒于搪瓷盤(pán)中,再行攪拌,同時(shí)用大鑷子,一面攪拌,一面將硬塊夾碎,去掉肉眼能看出的夾雜物,如腐爛的布條、草梗、小石塊等。然后,將樣品裝入廣口瓶中,貼上標簽,標明樣品號碼、醫院名稱(chēng)、采樣日期和處理前或處理后的情況等。

  三、污泥樣品的檢驗

  上述樣品處理后,應立即進(jìn)行檢驗,不能立即進(jìn)行檢驗時(shí),可適當加入約5—10毫升3~5%福爾馬林溶液或3%鹽酸溶液,瓶口上放置一個(gè)適宜大小的表面皿。然后放于冰箱內,以防微生物的繁殖和抑制蛔蟲(chóng)卵的發(fā)育。

  1 水洗

  從已經(jīng)處理過(guò)的500克污泥樣品中,稱(chēng)取100克置于500毫升錐形量杯中,加水約500毫升。用玻璃棒攪拌后靜置之。讓其自然沉淀,經(jīng)1~2小時(shí)后,倒去污泥上面的水,另?yè)Q清水攪拌后,再讓其自然沉淀,經(jīng)半小時(shí)后,再倒去上面的水,另加清水,如此反復進(jìn)行3~4次,直到污泥上面的水接近無(wú)色為止。

  2 過(guò)濾

  倒去沉淀上面的清水,用30孔/@金屬篩子過(guò)濾于另一500毫升錐形量杯中,棄去阻留在篩上的泥渣。沉淀20~30分鐘后,倒去沉淀上面的液體、另加清水,如此反復水洗2~3次,后倒去上清液,將沉淀物倒入10毫升離心管中。經(jīng)2500轉/分離心3分鐘后,倒去上清液。

  3 離心飄浮

  管內注入飽和食鹽水,經(jīng)用玻璃棒攪勻后,離心3分鐘,由于蛔蟲(chóng)卵比飽和鹽水的比重小,所以管中絕大多數的蛔蟲(chóng)卵均浮聚在液面。(注意:加入食鹽水量不得少于沉淀物的20倍)。

  4 離心沉淀

  用毛細吸管反復吸取管中斜面上的浮膜于另一離心管中。加入清水,經(jīng)攪勻后,再行離心,蟲(chóng)卵比水的比重大,因而下沉于管底。然后小心倒去上清液。

  5 培養

  注入2~3毫升清水于管中,加幾滴5%福爾馬林溶液,置于24~26℃恒溫箱中,培養15~20天。在培養過(guò)程中,清水不得少于0.5~1.0毫升。

  6 鏡檢

  樣品經(jīng)培養15~20天后取出。用毛細吸管吸去上面的清水,余下含蟲(chóng)卵的沉淀物。在一張干凈的載玻片的中央滴一滴清水。用毛細吸管吸一小滴沉淀物于水中。涂勻后蓋以蓋玻片,在低倍鏡下檢查,必要時(shí),再換以高倍鏡。記錄500個(gè)以上死、活蟲(chóng)卵數。查完一張片子而卵數不及500個(gè)時(shí),依同法作第二張涂片檢查。涂片不宜太厚。否則視野模糊不清,影響觀(guān)察。一般涂片厚度能以透過(guò)涂片尚能辯認報紙上的字跡為宜。而后在適宜的溫度和濕度下。經(jīng)過(guò)15~20天的培育?;罨紫x(chóng)卵就會(huì )逐漸發(fā)育到幼蟲(chóng)期。而死卵則在同一條件下仍然保持單細胞期或停留于某一發(fā)育階段。故易于區別。

  鏡檢時(shí)為達到較為快速而明顯地辨認幼蟲(chóng)起見(jiàn),可在載玻片上的滴一滴預先配好避光保存的30%次氯酸鈉溶液〔商品名為安替福明(antiformin〕以代替清水作成涂片,置于顯微鏡下觀(guān)察,可以看見(jiàn)被包在卵的外層的蛋白質(zhì)殼逐漸溶解,使卵內的幼蟲(chóng)一目了然。因此亦稱(chēng)此液為脫殼液。如遇沉淀物中渣子較多卵數較少時(shí),可以直接注入幾滴此脫殼液于離心管中,與沉淀物混合并攪勻之,而后吸一滴混合液于載玻片上,蓋以蓋玻片,直接鏡檢即可。此時(shí)視野格外清晰。

  在培養第15~20天未查見(jiàn)幼蟲(chóng)時(shí),應繼續培養到30天(注意:加過(guò)脫殼液的樣品,不能再繼續培養)。

  后,就500個(gè)以上的死、活蛔蟲(chóng)卵數,求出死卵的百分率。

  如此檢驗的全過(guò)程已告結束,可從冰箱中取出剩余的樣品,處理之。


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